辉骏生物科技号fitgene-wx 蛋白质组学、病毒包装、分子生物学、整体课题等实验技术服务专家！技术团队与实验设备，10年优秀品质服务，是您可信赖的生物医药科研好伙伴！实验服务咨询、整体课题研究合作请电辉骏全国免费服务热线：400-699-1663 或加腾讯企业：4006991663 蛋白质相互作用研究技术专题之共沉淀 蛋白质是分子功能的执行者，调控细胞中的所有生物系统。但是，通常它们不是“单打独斗”的，绝大多数的功能蛋白质会与其他蛋白质相互作用，一起调控生命过程。下面我们给大家介绍一下蛋白质相互作用研究中比较常用的一种技术——共沉淀（co-immunoprecipitation，coip）。 实验原理：coip利用抗原抗体之间具有特异的结合的原理，在细胞裂解液中加入特异性抗体，将抗原及与抗原结合的蛋白沉淀下来。复合物可以通过western blot的方法验证抗原和其他蛋白之间的相互作用，也可以用质谱的方法，检测抗原的结合蛋白成员。 实验步骤：coip实验是怎么做的呢？简单来说，coip实验大概包括下面的几个流程： 构建表达载体，转染细胞（此步适用诱饵蛋白是外源性的，内源性的直接进入下一步骤）→温和条件下收集细胞裂解物→细胞裂解物与抗体孵育，洗去未结合的蛋白→用合适的洗脱液将诱饵蛋白及结合的互作蛋白复合物洗脱下来→western blot或者质谱分析 coip技术的优缺点： 优点：（1）得到的互作蛋白是细胞内与诱饵蛋白天然互作的，符合体内真实生理情况；（2）实验条件温和，可避免人为的影响；（3）可分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 缺点：（1）不适用于结合力弱或者瞬间结合的蛋白互作研究。 coip实验效果受多种因素影响，需要注意以下几点： 1. 首先是抗体的质量，需要选用ip级别的抗体； 2. 其次细胞数目，一次coip实验建议使用2个10cm皿的生长至80%汇合度的细胞； 3. 细胞需用温和的裂解液提取蛋白，防止降解和人为修饰； 4. 务必设置对照，通常内源的蛋白可用nomal igg作为对照，外源的蛋白则用空载体转染细胞作为对照。 结语： coip的技术暂时介绍到这里了，同学们如果对实验有什么疑问，欢迎拨打我们的免费热线4006991663，我们的技术客服人员将详细为您解答。 ps：本周起，辉骏生物开启实验课堂系列课题，每周三更新，敬请关注。 ↓版 权 申 明↓ 本公众号部分内容由网络收集整理，仅为传播更多行业资讯、信息而转载。在此，对辛勤付出的原作者深表感谢！如作者不希望文章被转载，请拔打133-1605-3650 联系我们删除。